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Good’s緩沖液HEPES和PIPES教你如何選擇？

詳細(xì)說(shuō)明

我們?cè)谑褂肎ood’s緩沖液的時(shí)候，總是不經(jīng)意的把Good’s緩沖液中的HEPES和PIPES弄混，認(rèn)為它們是一樣的，導(dǎo)致無(wú)法很準(zhǔn)確的區(qū)別開(kāi)。其實(shí)它們之間有共性但是也存在著很多不同的特性。特別是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中，一點(diǎn)細(xì)微的差別可能就導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的失敗。所以我們要清楚什么是緩沖液，它是做什么的？才能去區(qū)分緩沖液中HEPES和PIPES它們之間的差別到底在哪里？我們?cè)谑褂脮r(shí)應(yīng)該注意些什么？

緩沖液是一類(lèi)專(zhuān)用于生命科學(xué)研究的緩沖體系，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，緩沖溶液起著不可或缺的作用，它能夠抵制外界少量強(qiáng)酸和強(qiáng)堿的影響，為體系維持最貼近生理環(huán)境的pH值。HEPES和PIPES緩沖液都是生物實(shí)驗(yàn)中常用的緩沖液。

德晟生物緩沖劑包裝圖片

HEPES的pH緩沖范圍是6.8-8.2，是一種兩性離子生物緩沖劑，溶于水，不與金屬離子形成穩(wěn)定的配合物，多數(shù)情況下，不會(huì)干擾生物化學(xué)過(guò)程，可廣泛應(yīng)用于多種生物化學(xué)反應(yīng)，并在某些細(xì)胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑。HEPES常用于各種類(lèi)型生物體的細(xì)胞培養(yǎng)基中；在蛋白質(zhì)研究中，PIPES常用作陽(yáng)離子交換色譜法中結(jié)合緩沖液的組分和洗脫液；在DNA研究中，PIPES用作磷酸鈣和DNA沉淀物形成體系的緩沖液，AFM以及電穿孔實(shí)驗(yàn)中的緩沖液。另外，HEPES對(duì)DNA和限制酶之間的反應(yīng)有一定干擾，也不適合用于Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。HEPES緩沖液常用于細(xì)胞器和極易變性的、對(duì)pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作，以及生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。它是一種氫離子緩沖劑，能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/LHEPES即可達(dá)到緩沖能力。

PIPES的pH緩沖范圍是6.1-7.5，不溶于水，溶于NaOH水溶液。PIPES不同于含二（2-羥乙基）氨基基團(tuán)的緩沖劑（如Bis-tris，Bicine），與多數(shù)金屬離子不能形成穩(wěn)定配合物，適用于含有金屬離子的溶液體系中的緩沖劑。根據(jù)已有的研究結(jié)果，PIPES可被應(yīng)用于使用磷酸纖維素色譜純化微管蛋白，用于凝膠過(guò)濾法純化重組GTP結(jié)合蛋白ARF1和ARF2，作為緩沖液從大腸桿菌中結(jié)晶轉(zhuǎn)酮酶。另外，由于PIPES能形成自由基，因此不適合應(yīng)用于氧化還原體系。在陽(yáng)離子交換色譜法，應(yīng)當(dāng)使用低濃度的PIPES緩沖液，這是因?yàn)镻IPES具有相對(duì)較大的離子強(qiáng)度，而且其pKa值具有濃度依賴(lài)性。

       

以上可知PIPES和HEPES都不能和金屬離子形成穩(wěn)定的配合物，適合于含有金屬離子的溶液體系。但它們之間也具有一定的差異性，溶解性方面，PIPES不溶于水，而HEPES具有良好的水溶性；緩沖范圍方面，PIPES偏酸性到中性，HEPES偏中性到堿性，這主要是由于兩者的結(jié)構(gòu)差異決定的，PIPES有兩個(gè)磺酸基，HEPES